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技術文獻

10種病原體PCR檢測試劑盒使用方法

文字:[大][中][小] 2023-4-24    瀏覽次數:577    
10種病原體PCR檢測試劑盒使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導大量的催化反應,產生可供觀察的顯色反應現象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。   24μg/ml    5號標準品    150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
 12μg/ml    4號標準品    150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
 6μg/ml     3號標準品    150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
 3μg/ml     2號標準品    150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
 1.5μg/ml   1號標準品    150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
 嗜水氣單胞菌
 肺炎鏈球菌
 產氣腸桿菌
 肺炎克雷伯氏菌肺炎亞種
 奇異變形桿菌
 化膿性鏈球菌
 陰溝腸桿菌陰溝亞種
 嗜熱脂肪地芽孢桿菌
 嗜熱鏈球菌
 費氏志賀氏菌(福氏志賀氏菌)
 Hyphomonas adhaerens
 脫硫弧菌脫硫亞種(脫硫微螺菌、脫硫螺菌、脫硫桿菌、脫硫芽孢弧菌、脫硫弧菌)
 厭氧消化鏈球菌
 銅綠假單胞菌(綠膿桿菌)
 纖維纖維微菌
 長野解普魯蘭桿菌
 變異鏈球菌
 人蒼白桿菌
 戊糖乳桿菌
 菊糖芽孢乳桿菌
 豇豆慢生根瘤菌
 長雙歧桿菌
 鰒發光桿菌
 斯氏梭菌
 嗜鹽四聯球菌
 海蘇特氏菌
 耐久腸球菌(堅韌鏈球菌)
 海氏腸球菌
 盲腸腸球菌
 伴放線放線桿菌
 類干酪乳桿菌類干酪亞種
 嗜肺軍團菌
 谷氨酸棒狀桿菌(黃色短桿菌)
 發酵纖維單胞菌
 長赤細菌
 海洋鹽單胞菌
 Georgenia muralis
 河流弧菌


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