在ELISA檢測中，稀釋對照是校正鉤狀效應(yīng)影響的核心手段，其必要性體現(xiàn)在以下三方面：
一、驗證線性范圍與鉤狀效應(yīng)
當(dāng)樣本中抗原濃度過高時，過量抗原會同時結(jié)合固相抗體和酶標(biāo)抗體，導(dǎo)致無法形成有效的"夾心"復(fù)合物，信號值異常偏低（鉤狀效應(yīng)）?。通過梯度稀釋（如1:10、1:100、1:1000）可觀察：
若信號值隨稀釋比例線性遞減，說明原樣本濃度在有效范圍內(nèi)
若稀釋后信號值顯著升高（如1:100稀釋后信號值>1:10），則確認(rèn)存在鉤狀效應(yīng)?
二、排除基質(zhì)干擾
樣本中的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等成分可能非特異性結(jié)合抗體，導(dǎo)致假性高/低信號。稀釋可降低干擾物濃度，通過比較不同稀釋倍數(shù)的結(jié)果偏差（如未稀釋時信號異常，稀釋后恢復(fù)正常）判斷基質(zhì)效應(yīng)?。
三、確保結(jié)果可靠性
平行檢測不同稀釋樣本時，若計算濃度接近（如1:10與1:100稀釋結(jié)果偏差<15%），可排除操作誤差；若偏差較大，需重新檢測或調(diào)整稀釋方案?。
?操作建議?：對高濃度樣本（如重組蛋白、感染性疾病樣本）必須進(jìn)行預(yù)稀釋實驗，選擇使信號值落在標(biāo)準(zhǔn)曲線中段的稀釋倍數(shù)（通常1:100-1:1000）?。若仍存在鉤狀效應(yīng)，可嘗試更換檢測方法（如化學(xué)發(fā)光法）或使用F(ab')2片段酶標(biāo)抗體?。